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    產(chǎn)酸克雷伯菌探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒

    • 更新時(shí)間:  2020-06-01
    • 產(chǎn)品型號(hào):  50T
    • 簡單描述
    • 產(chǎn)酸克雷伯菌探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
    詳細(xì)介紹

    注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

    產(chǎn)品名稱

    產(chǎn)酸克雷伯菌探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒

    英文名稱

    Klebsiella oxytoca

    貨號(hào)

    CP934386

    儲(chǔ)存條件:

    14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
    1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
    2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
    3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
    4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
    5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

    探針法:

    產(chǎn)酸克雷伯菌探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒aqMan 探針是一種寡核苷酸探針,它的熒光與目的序列的擴(kuò)增相關(guān)。它與目標(biāo)序列上游引物和下游引物之間的序列配對(duì)。熒光基團(tuán)連接在探針的5’ 末端,而淬滅劑則在3’ 末端。當(dāng)完整的探針與目標(biāo)序列配對(duì)時(shí),熒光基團(tuán)發(fā)射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅。但在進(jìn)行延伸反應(yīng)時(shí),聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進(jìn)行酶切,使得熒光基團(tuán)與淬滅劑分離。隨著擴(kuò)增循環(huán)數(shù)的增加,釋放出來的熒光基團(tuán)不斷積累。因此熒光強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關(guān)系。相對(duì)于染料法,Taqman探針法具有更高的特異性和準(zhǔn)確性。
    使用方法:
    一、樣品DNA的制備
    用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意:DNA純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
    二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線(以10-10E6這6個(gè)10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對(duì)照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DN段作為陽性對(duì)照。
    1. 標(biāo)記6個(gè)離心管,分別為6,5,4,3,2和1號(hào)。
    2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水(用帶芯槍頭,下同)。
    3. 先將本試劑盒提供的陽性對(duì)照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL(注:請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL,建議每次稀釋10倍,梯度稀釋至10E7拷貝/μL)。
    4. 在6號(hào)管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得10E6拷貝/μL的陽性對(duì)照。
    5. 換槍頭,從6號(hào)管中取5 μL溶液到5號(hào)管中,充分震蕩1分鐘,得10E5拷貝/μL的陽性對(duì)照。
    6. 換槍頭,從5號(hào)管中取5 μL溶液到4號(hào)管中,重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。
    7. NC管中不加任何陽性對(duì)照。
    8. 從1-6號(hào)管中分別取5 μL和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量PCR(見下步),每個(gè)樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個(gè)陽性對(duì)照稀釋樣品的熒光PCR Ct值,并以之為縱軸,以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
    探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖:

    應(yīng)用案例:
    樣品 DNA 的制備
    1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級(jí)版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費(fèi)贈(zèng)送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAout 的成分)。
    稀釋陽性對(duì)照(以 10E2-10E7 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照,只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DN段作為陽性對(duì)照。
    2.標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
    3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
    4.在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對(duì)照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。5.換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
    6.換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
    7.換槍頭,在 4 號(hào)管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對(duì)照到 4 號(hào)管中,得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用
    8.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。放冰上待用。設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20  μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)
    9.在 PCR 管中加入下列成分。
    以下是公司正在銷售的產(chǎn)品:

    1,2,4-三羥基細(xì)胞組蛋白酰轉(zhuǎn)移酶(HAT)總活性比色法定量檢測(cè)試盒

    1,2-二氨基組織組蛋白酰轉(zhuǎn)移酶(HAT)總活性比色法定量檢測(cè)試盒

    1,2-二苯胺血小板活化因子酰水解酶(PAF AH)活性比色法定量檢測(cè)試盒

    1,2-二氧基血液卵脂膽固醇酰轉(zhuǎn)移酶(LCAT)活性比色法定量檢測(cè)試盒

    1,2-二羥基血液卵脂膽固醇酰轉(zhuǎn)移酶(LCAT)活性熒光定量檢測(cè)試盒

    產(chǎn)酸克雷伯菌探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒1,2-二血液卵脂膽固醇酰轉(zhuǎn)移酶(LCAT)活性酶連續(xù)循環(huán)反應(yīng)比色法定量檢測(cè)試盒

    1,2-環(huán)硫細(xì)胞酰輔酶A膽固醇酰轉(zhuǎn)移酶(ACAT)活性比色法定量檢測(cè)試盒

    1,2-環(huán)氧組織酰輔酶A膽固醇酰轉(zhuǎn)移酶(ACAT)活性比色法定量檢測(cè)試盒

    1,2-雙(2-氧基)植物酰輔酶A膽固醇酰轉(zhuǎn)移酶(ACAT)活性比色法定量檢測(cè)試盒

    1,2-雙(二氨基)酵母酰輔酶A膽固醇酰轉(zhuǎn)移酶(ACAT)活性比色法定量檢測(cè)試盒

    1,3,5-三基環(huán)己細(xì)胞酰輔酶A膽固醇酰轉(zhuǎn)移酶(ACAT)活性熒光定量檢測(cè)試盒

    1,3-二氨基組織酰輔酶A膽固醇酰轉(zhuǎn)移酶(ACAT)活性熒光定量檢測(cè)試盒

    1,3-二植物酰輔酶A膽固醇酰轉(zhuǎn)移酶(ACAT)活性熒光定量檢測(cè)試盒

    1,3-二氰酵母酰輔酶A膽固醇酰轉(zhuǎn)移酶(ACAT)活性熒光定量檢測(cè)試盒

    1,3-二氧雜環(huán)戊NADH濃度比色法定量檢測(cè)試盒pmR-mCherrypmR-mCherry低溫運(yùn)輸,-20℃保存2 ug

    pMMB66EHpMMB66EH低溫運(yùn)輸,-20℃保存2 ug

    pMMB206pMMB206低溫運(yùn)輸,-20℃保存2 ug

    pMK-SCN5A donor(310)pMK-SCN5A donor(310)低溫運(yùn)輸,-20℃保存2 ug

    pMKO.1-puro hTERT shRNApMKO.1-puro hTERT shRNA低溫運(yùn)輸,-20℃保存2 ug

    pMKO.1-puropMKO.1-puro低溫運(yùn)輸,-20℃保存2 ug

    pMKO.1 GFP B56α shRNA 6-3pMKO.1 GFP B56α shRNA 6-3低溫運(yùn)輸,-20℃保存2 ug

    pMito-iRFPpMito-iRFP低溫運(yùn)輸,-20℃保存2 ug

    pmiRZip anti-microRNApmiRZip anti-microRNA低溫運(yùn)輸,-20℃保存2 ug

    pMIR-REPORT LuciferasepMIR-REPORT Luciferase低溫運(yùn)輸,-20℃保存2 ug


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