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    犬鏈球菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒

    • 更新時間:  2020-06-02
    • 產(chǎn)品型號:  50T
    • 簡單描述
    • 犬鏈球菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒所謂實(shí)時熒光定量PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
    詳細(xì)介紹

    產(chǎn)品名稱

    犬鏈球菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒

    英文名稱

    Streptococcus canis

    貨號

    CP934744

    儲存條件:

    14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
    1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
    2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
    3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
    4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
    5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

    探針法:

    犬鏈球菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒aqMan 探針是一種寡核苷酸探針,它的熒光與目的序列的擴(kuò)增相關(guān)。它與目標(biāo)序列上游引物和下游引物之間的序列配對。熒光基團(tuán)連接在探針的5’ 末端,而淬滅劑則在3’ 末端。當(dāng)完整的探針與目標(biāo)序列配對時,熒光基團(tuán)發(fā)射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅。但在進(jìn)行延伸反應(yīng)時,聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進(jìn)行酶切,使得熒光基團(tuán)與淬滅劑分離。隨著擴(kuò)增循環(huán)數(shù)的增加,釋放出來的熒光基團(tuán)不斷積累。因此熒光強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關(guān)系。相對于染料法,Taqman探針法具有更高的特異性和準(zhǔn)確性。
    使用方法:
    一、樣品DNA的制備
    用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意:DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
    二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線(以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DN段作為陽性對照。
    1. 標(biāo)記6個離心管,分別為6,5,4,3,2和1號。
    2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水(用帶芯槍頭,下同)。
    3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL,建議每次稀釋10倍,梯度稀釋至10E7拷貝/μL)。
    4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得10E6拷貝/μL的陽性對照。
    5. 換槍頭,從6號管中取5 μL溶液到5號管中,充分震蕩1分鐘,得10E5拷貝/μL的陽性對照。
    6. 換槍頭,從5號管中取5 μL溶液到4號管中,重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。
    7. NC管中不加任何陽性對照。
    8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進(jìn)行定量PCR(見下步),每個樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
    探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖:

    應(yīng)用案例:
    樣品 DNA 的制備
    1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費(fèi)贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAout 的成分)。
    稀釋陽性對照(以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DN段作為陽性對照。
    2.標(biāo)記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
    3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
    4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
    6.換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
    7.換槍頭,在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中,得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
    8.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20  μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)
    9.在 PCR 管中加入下列成分。
    以下是公司正在銷售的產(chǎn)品:

    PRDX5/PRDX6  過氧化還原酶5/6抗體大鼠α2巨球蛋白(α2-MG)ELISA試盒

    PRDX3/peroxiredoxin 3  過氧化還原酶3抗體大鼠α2-HS糖蛋白(AHSG)ELISA試盒

    PRDX2/Peroxiredoxin-SO3  硫氧還蛋白過氧化物酶2大鼠α1微球蛋白(α1-MG)ELISA試盒

    PRDX1  過氧化還原酶1抗體大鼠α1酸性糖蛋白(α1-AGP)ELISA試盒

    PRDM2/RIZ1  鋅指蛋白RIZ1抗體大鼠α1抗胰蛋白酶前體(pre-α1-AT)ELISA試盒

    PRDM1/Blimp1  B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)成熟蛋白1抗體大鼠VGF神經(jīng)生長因子誘導(dǎo)蛋白(VGF)ELISA試盒

    犬鏈球菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒PRCP  脯氨酰羧肽酶抗體大鼠U型肌酸激酶,線粒體(CKMT1A)ELISA試盒

    PRC1  胞質(zhì)分裂調(diào)控蛋白1抗體大鼠T細(xì)胞活化核因子5(NFAT5)ELISA試盒

    PRB2/p130  視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤相關(guān)蛋白p130抗體大鼠Toll樣受體9(TLR9)ELISA試盒

    PRAS40/AKT1 substrate 1  蛋白激酶AKT底物1抗體大鼠Toll樣受體7(TLR-7)ELISA試盒

    PRAME  黑色素瘤優(yōu)先表達(dá)抗原抗體大鼠Toll樣受體4(TLR4)ELISA試盒

    PR (progesterone receptor)  孕激素受體抗體大鼠toll樣受體3(TLR3)ELISA試盒

    PPY/Pancreatic hormone  胰腺激素抗體大鼠toll樣受體1(TLR1)ELISA試盒

    PPT1  棕櫚酰蛋白硫酯酶1抗體大鼠TGF-β誘導(dǎo)早期基因1(TIEG1)ELISA試盒

    PPP4C  絲氨酸/蘇氨酸蛋白酸酶4C抗體大鼠Tau蛋白ELISA試盒蘇木色精Hematoxylin室溫避光保存10g

    蘇丹黑 BSudan Black B 室溫保存5g

    蘇丹ⅢSudan Ⅲ室溫保存5g

    四氧嘧啶Alloxan Momohydrate4℃保存5g

    四鹽酸精胺Spermidine 4HCl室溫保存1g

    四硼酸鈉,十水Sodium Tetraborate Decahydrate 室溫保存500g

    四基二胺1,2-bis(Dimethylamino)(TEMED)    室溫避光保存25mL

    四基二胺N,N,N',N'-Tetramethylethylenediamine(TEMED) 4℃避光保存25mL

    四氮唑藍(lán) NBT4℃避光保存250mg

    絲狀真菌線粒體DNAoutFilamentous Fungal   mtDNAOUT常溫15次

    注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。


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