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    皺紋毛圓線蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒

    • 更新時間:  2020-06-03
    • 產(chǎn)品型號:  50T
    • 簡單描述
    • 皺紋毛圓線蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒所謂實時熒光定量PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
    詳細介紹

    注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

    產(chǎn)品名稱

    皺紋毛圓線蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒

    英文名稱

    Trichostrongylus rugatus

    貨號

    CP934829

    儲存條件:

    14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
    1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
    2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
    3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
    4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
    5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

    探針法:

    皺紋毛圓線蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒aqMan 探針是一種寡核苷酸探針,它的熒光與目的序列的擴增相關(guān)。它與目標序列上游引物和下游引物之間的序列配對。熒光基團連接在探針的5’ 末端,而淬滅劑則在3’ 末端。當(dāng)完整的探針與目標序列配對時,熒光基團發(fā)射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅。但在進行延伸反應(yīng)時,聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進行酶切,使得熒光基團與淬滅劑分離。隨著擴增循環(huán)數(shù)的增加,釋放出來的熒光基團不斷積累。因此熒光強度與擴增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關(guān)系。相對于染料法,Taqman探針法具有更高的特異性和準確性。
    使用方法:
    一、樣品DNA的制備
    用自選方法提取細菌樣品DNA。注意:DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
    二、制備O157:H7標準曲線(以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DN段作為陽性對照。
    1. 標記6個離心管,分別為6,5,4,3,2和1號。
    2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水(用帶芯槍頭,下同)。
    3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至10E7拷貝/μL,建議每次稀釋10倍,梯度稀釋至10E7拷貝/μL)。
    4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得10E6拷貝/μL的陽性對照。
    5. 換槍頭,從6號管中取5 μL溶液到5號管中,充分震蕩1分鐘,得10E5拷貝/μL的陽性對照。
    6. 換槍頭,從5號管中取5 μL溶液到4號管中,重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。
    7. NC管中不加任何陽性對照。
    8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進行定量PCR(見下步),每個樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標準曲線。
    探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖:

    應(yīng)用案例:
    樣品 DNA 的制備
    1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAout 的成分)。
    稀釋陽性對照(以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DN段作為陽性對照。
    2.標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
    3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
    4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
    6.換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
    7.換槍頭,在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中,得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
    8.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20  μL 體系,在樣品制備室進行)
    9.在 PCR 管中加入下列成分。
    以下是公司正在銷售的產(chǎn)品:

    Phospho-Btk(Ser180)  酸化蛋白酪氨酸激酶ATK抗體亞硫酸鉍瓊脂培養(yǎng)基Bismuth Sulfite Agar Medium

    Phospho-BRCA1(Ser988)  酸化乳腺癌易感基因1抗體馬鈴薯葡萄糖瓊脂Potato Dextrose Agar

    Phospho-BRCA1(Ser1524)  酸化乳腺癌易感基因1抗體10%酒石酸溶液10% sterile tartaric acid solution

    Phospho-BRCA1(Ser1423)  酸化乳腺癌易感基因1抗體pH7.0 緩沖化鈉蛋白胨溶液Buffered Sodium Chloride-peptone Solution pH 7.0

    Phospho-BRCA1(Ser1189)  酸化乳腺癌易感基因1抗體流體硫醇酸鹽培養(yǎng)基Fluid Thioglycollate Medium

    皺紋毛圓線蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒phospho-B-Raf (Thr597)  酸化B-Raf抗體大豆-酪蛋白消化物培養(yǎng)基Soybean-Casein Digest Medium

    phospho-B-Raf (Thr401)  酸化B-Raf抗體抗生素培養(yǎng)基 1 號Medium 1Penassay Seed Agar

    phospho-B-Raf (Ser602)  酸化B-Raf抗體抗生素培養(yǎng)基 2 號Medium 2Penassay Base Agar

    phospho-B-Raf (Ser446)  酸化B-Raf抗體抗生素培養(yǎng)基 3 號Medium 3Penassay Broth

    phospho-B-Raf (Ser444)  酸化B-Raf抗體抗生素培養(yǎng)基 4 號Medium 4Yeast Beef Agar

    phospho-B-Raf (Ser365)  酸化B-Raf抗體抗生素培養(yǎng)基 5 號Medium 5Streptomycin Assay Agar

    Phospho-BMX/ETK (Tyr556)  酸化非受體性蛋白酪氨酸激酶ETK抗體抗生素培養(yǎng)基 8 號Medium 8

    Phospho-BMX/ETK (Tyr40)  酸化非受體性蛋白酪氨酸激酶ETK抗體抗生素培養(yǎng)基 9 號Medium 9Polymyxin Base Agar

    Phospho-BLNK(Tyr96)  酸化T淋巴細胞連接蛋白抗體抗生素培養(yǎng)基 10 號Medium 10Polymyxin Seed Agar

    Phospho-BLNK(Tyr84)  酸化T淋巴細胞連接蛋白抗體抗生素培養(yǎng)基 11 號Medium11Neomycin Assay Agar高載量PCR片段純化試盒Maxi PCR Clean-Up Kit常溫100次

    高效農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞制備試盒20次

    高效E.coli感受態(tài)細胞制備試盒High Efficiency E.coli Competent Cell Preparation Kit 低溫20次

    高pH 緩沖液套裝High pH Buffer Set常溫保存(5×高pH上樣液需要-20℃保存)30次

    高GC革陽性細菌 PCR Mix 5(RPB1)Bacterial DNA Barcoding PCR Mix-20℃保存100次

    高GC DNA清除,PCR級High GC DNA Erasol常溫1.5mL

    剛果紅Congo Red室溫保存5g

    干粉型TB培養(yǎng)基TB Medium Powder常溫250g

    干粉型SOC培養(yǎng)基SOC Medium Powder常溫250g

    干粉型SOB培養(yǎng)基SOB Medium Powder常溫250g


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