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    小鼠胎兒表皮角質(zhì)形成層細(xì)胞提取物

    • 更新時間:  2020-07-06
    • 產(chǎn)品型號:  
    • 簡單描述
    • 小鼠胎兒表皮角質(zhì)形成層細(xì)胞提取物現(xiàn)貨供應(yīng),質(zhì)量有保證、*、實驗效果好,我司為您提供免費(fèi)代測服務(wù),同時提供價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關(guān)操作說明。
    詳細(xì)介紹

    培養(yǎng)步驟:
    一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
    1)準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080),85%;北美胎牛血清(United States,GIBCO,貨號16000-044),15%。
    2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
    3)凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
    二.細(xì)胞處理:
    1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
    2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
    對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
    1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
    2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
    3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
    4.將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
    3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

    小鼠胎兒表皮角質(zhì)形成層細(xì)胞提取物是從小鼠原代胎兒表皮角質(zhì)形成層細(xì)胞提取的,小鼠原代胎兒表皮角質(zhì)形成層細(xì)胞從正常小鼠胚胎組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。
    總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。

    cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA鏈,以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

    蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備小鼠胎兒表皮角質(zhì)形成層組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。

    潛在的應(yīng)用: <1>已知基因的PCR克?。?lt;2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標(biāo)測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué);<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。

    產(chǎn)品名稱

     小鼠胎兒表皮角質(zhì)形成層細(xì)胞提取物

    英文名稱

    Mouse Embryo: Normal Fetal Epidermal Keratinocytes Derivatives

    貨號

    CS-X3695

     


    細(xì)胞分類:

    一種:
    是凍存產(chǎn)品,由氮直液接拿出,干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種,也較少使用這種方式,因為復(fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大,一旦細(xì)胞狀態(tài)不好,很難說是細(xì)胞自身不行,還是復(fù)蘇沒操作好;另外溫度對細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大,也不是細(xì)胞儲存的方式,快遞時間也很難控制,多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量;干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
    第二種:
    是我們復(fù)蘇好細(xì)胞,QC通過后,T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶,排除復(fù)蘇造成影響,常溫運(yùn)輸也對細(xì)胞影響也不大,只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
    質(zhì)量保證:我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買到貨后,由我們實驗室擴(kuò)增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,進(jìn)口來源,保證5代以內(nèi),活力>95%,無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
    細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn):
    1.研究的對象是活細(xì)胞
    在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
    2.研究條件可以人為控制
    pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實際需要進(jìn)行人為的控制,同時,可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
    3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
    通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時,可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
    4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
    采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
    以下是公司正在銷售的相關(guān)產(chǎn)品: 

    0.094ng/ml左右決定因子1(LEFTY1)檢測試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Phusion High-Fidelity PCR Master Mix with HF Buffer

    0.094ng/ml左右決定因子1(LEFTY1)檢測試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Phusion High-Fidelity PCR Master Mix with HF Buffer

    18.75pg/ml左右決定因子1(LEFTY1)檢測試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Phusion High-Fidelity PCR Master Mix with GC Buffer

    9.375pg/mlCerberus蛋白(CER)檢測試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Phusion High-Fidelity PCR Master Mix with GC Buffer

    0.469ng/ml Cerberus蛋白(CER)檢測試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Phusion U Hot Start PCR Master Mix

    0.188ng/mlHtrA絲氨肽酶4(HTRA4)檢測試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Phusion U Hot Start PCR Master Mix

    0.094ng/ml紅細(xì)胞生成素(EPO)檢測試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Phusion Green High-Fidelity DNA Polymerase (2 U/µL)

    18.75pg/ml胞外超氧化物歧化酶(SOD3)檢測試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Phusion Green High-Fidelity DNA Polymerase (2 U/µL)

    0.094ng/ml組蛋白H4(H4)檢測試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Phusion Green Hot Start II High-Fidelity DNA Polymerase (2 U/µL)

    0.234ng/ml半乳糖凝集素9(GAL9)檢測試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Phusion Green Hot Start II High-Fidelity DNA Polymerase (2 U/µL)
    小鼠胎兒表皮角質(zhì)形成層細(xì)胞提取物雌激素受體α(ERα)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)2,3-二苯酚(標(biāo)準(zhǔn)品)

    膽囊收縮素B受體(CCKBR)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)2,5-二酚標(biāo)準(zhǔn)溶液(分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99.8%)

    催產(chǎn)素(OT)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)2,6-二叔基對酚(BHT)(分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99.7%(GC))

    凋亡蛋白酶激活因子1(APAF1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)4,4'-二氨基二苯醚(ODA)(標(biāo)準(zhǔn)品)

    V-Myb髓細(xì)胞組織增生病癌基因同源物(MYB)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)鄰苯二二癸酯(分析標(biāo)準(zhǔn)品,用于環(huán)境分析)

    70kDa熱休克蛋白4(HSPA4)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)2,4-二氯苯(標(biāo)準(zhǔn)品)

    泛素連接酶E3A(UBE3A)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)二十二(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC))

    多聚免疫球蛋白受體(PIGR)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)二(分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.5%)

    促胰液素(SCT)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)1,2-二標(biāo)準(zhǔn)溶液(100 mg/l溶于醇)

    促胰液素受體(SCTR)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)正癸(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.8%(GC))

    ⅡD組脂酶A2(PLA2G2D)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)1,1-二氯(分析標(biāo)準(zhǔn)品,用于環(huán)境分析,≥99.7%(GC))

    S100鈣結(jié)合蛋白A13(S100A13)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)2,4-二硝基苯標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,溶:醇)

    通用轉(zhuǎn)錄因子ⅡH肽1(GTF2H1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)2,4-二硝基苯標(biāo)準(zhǔn)溶液(1.00mg/ml,基體:醇)

    S100鈣結(jié)合蛋白A12(S100A12)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)2,4-二硝基苯(分析標(biāo)準(zhǔn)品,用于環(huán)境分析)

    70kDa熱休克蛋白1A(HSPA1A)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)鄰苯二二癸酯(標(biāo)準(zhǔn)品)

     


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